Методы определения чувствительности к антибиотикам

Содержание

Все о резистентности и методах определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Резистентность к антибиотикам – это способность патогенных бактерий проявлять устойчивость к воздействию терапевтических концентраций антибактериальных препаратов. Устойчивость к антибиотикам разделяют на врожденную и приобретенную.

Под врожденной резистентностью подразумевают отсутствие у бактерии мишени, на которую может действовать применяемый антибиотик, слишком низкую проницаемость бактериальной мембраны для препарата, способность инактивировать лекарство при помощи ферментов либо активно выводить его из бактериальной клетки.

Приобретенная устойчивость возникает как следствие мутации возбудителя, благодаря которой он может свободно переносить концентрации антибиотика, достаточные для инактивации других бактерий данного вида.

Резистентность к антибиотикам

Стремительный рост устойчивости бактерий к антибиотикам представляет серьезную угрозу для здоровья и жизни людей. По статистике ВОЗ, вероятность смертельного исхода заболевания у пациента, инфицированного метициллино-резистентными штаммами стафилококка (MRSA ), на 70% выше, чем у больного, инфицированного обычными, чувствительными к антибиотикам штаммами.

Во многих странах наблюдается тенденция к росту резистентности E. Coli (основного возбудителя инфекций мочевыводящих путей) к фторхинолонам и цефалоспоринам.

Все чаще регистрируются случаи устойчивости бактерий к препаратам резерва для данной инфекции (карбапенемы для Klebsiella pneumonia, 3-е поколение цефалоспоринов для гонореи) и т.д.

То есть, те заболевания, которые на протяжении многих лет эффективно лечились антибактериальными препаратами сегодня, снова представляют опасность для населения.

В некоторых случаях, тест на чувствительность к антибиотикам показывает частичную или полную устойчивость к большинству «классических» для данной инфекции антибиотиков.

Такая неутешительная картина связана с частым нерациональным и необоснованным применением противомикробных средств.

Многие пациенты покупают лекарства не по назначению врача, а по рекомендации друзей, фармацевтов в аптеке, после просмотра рекламы или просто вспомнив, что когда-то этот препарат уже помогал.

Также, у многих существуют «любимые» лекарства, которые принимаются по несколько дней при первых признаках заболевания.

Важно понимать, что самоназначение антибиотиков, самостоятельная коррекция назначенных дозировок, кратности приема и длительности курса способствует формированию и распространению бактерий с приобретенной устойчивостью к антибиотикам.

Читайте далее: Мазок из зева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам

Как развивается устойчивость к противомикробным препаратам?

Вторичная (приобретенная) резистентность к антибиотикам развивается за счет спонтанных мутаций в геноме микробной клетки после контакта с противомикробным средством. Важной особенностью данных мутаций является их способность «запоминаться» бактериями и передаваться следующим поколения патогенов. Это способствует быстрому распространению устойчивых штаммов в окружающей среде.

Степень резистентности (сниженная чувствительность к антибиотикам или полная устойчивость), а также скорость ее развития зависит от видов и штаммов бактерий.

Быстрее всего под действием антибиотиков мутируют:

  • стафилококки (грамположительные кокки);
  • эшерихии (грамотрицательные бактерии);
  • микоплазмы (внутриклеточные возбудители);
  • протей (грам- бактерии);
  • синегнойная палочка (грамотрицательные бактерии).

Достаточно редко встречаются  антибиотикорезистентные стрептококки группы А, клостридии, сибироязвенные и гемофильные палочки.

Среди механизмов формирования устойчивости, на данный момент наиболее важными считают:

  • ферментную инактивацию антибиотика;
  • модификацию молекул-мишеней в микробной клетке;
  • способность возбудителей активно выводить антибиотик (эффлюкс);
  • снижение проницаемости микробной мембраны для лекарства.

Поскольку активное выведение и нарушение проницаемости основаны на ограничении доступа антибиотика в бактериальную клетку, их часто объединяют в один механизм резистентности.

Что значит чувствительность к антибиотикам

В связи с ростом резистентности ко многим противомикробным средствам, определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам позволяет проводить противомикробную терапию максимально рационально и эффективно.

Итак, чувствительность к антибиотикам. Всех возбудителей инфекционно-воспалительных болезней можно разделить на:

  • чувствительные;
  • малочувствительные;
  • полностью устойчивые.

Если рост и размножение бактерий на питательной среде подавляются терапевтическими дозировками антибиотиков, то бактерии считаются чувствительными. Малочувствительные штаммы, реагируют только на максимальные дозировки лекарственного средства.

Резистентными к антибиотику считаются патогены, которые ингибируются только критически высокими дозами антибактериальных средств, достичь которых можно исключительно в условиях лаборатории, но не в человеческом организме.

Как определить чувствительность к антибиотикам?

Этиотропное назначение противомикробных препаратов основывается на выделении возбудителя с дальнейшим  определением чувствительности к антибиотикам. Этот анализ позволяет получить эпидемиологические показатели устойчивости патогенных микроорганизмов в определенном регионе, а также изучить структуру внутрибольничных и внебольничных инфекций.

При проведении пробы на чувствительность к антибиотикам, необходимо соблюдать определенный алгоритм действий и четко соблюдать все звенья бактериологической диагностики.

Этапность исследования состоит из:

  • забора материала;
  • доставки в лабораторию;
  • посевов на специальные среды;
  • выделения вида и штамма возбудителя;
  • изучения чувствительности к противомикробным средствам.

Важно понимать, что достоверные данные анализа можно получить только при правильном выполнении всех этапов диагностики.

Читайте далее: Расшифровка посева на флору с определением чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Чувствительность к антибиотикам  исследуется при помощи:

  • диффузии (диски с противомикробными препаратами или E-тесты);
  • разведения (для этого используют агар или жидкие питательные среды (бульон)).

Как сделать пробу на антибиотик?

Наиболее популярным качественным методом диагностики считается диффузия в агар с использованием метода дисков.

Для того, что бы изучить чувствительность к антибиотикам при помощи диффузии с дисками, необходимо засеять исследуемым патогенном питательную среду с агаром и поместить сверху диски с антибактериальными препаратами. Далее, чашка Петри с образцами выдерживается в термостате при температуре от 35 до 37 0С в течение суток.

По истечению 24 часов оценивают зоны ингибирования роста бактерий вокруг дисков. Данный метод диагностики является качественным, то есть диффузия-дисками определяет — чувствителен возбудитель к антибиотику или нет.

Для оценивания степени чувствительности измеряют зону ингибирования роста. При полной резистентности бактерии к антибиотику зона задержки полностью отсутствует.

О слабой чувствительности говорит задержка до 1.5 сантиметра. Препараты с такими показателями являются неэффективными для эрадикации исследуемого возбудителя.

Умеренно эффективными (показатели стандартной чувствительности) являются антибиотики с задержкой роста от 1.5 до 2.5 сантиметров. О высокой чувствительности свидетельствует зона ингибирования роста более 2.5 сантиметров.

Кроме диско-диффузного метода могут применяться полоски E-тестов. Алгоритм действий аналогичен предыдущему, только вместо пропитанных противомикробным средством дисков используют полоску с Е-тестом, содержащую разметку с градиентом концентраций изучаемого антибиотика (от максимума к минимуму).

Полоски с Е-тестом

Важно помнить, что диффузные методы неэффективны для выявления МКП (минимальные концентрации подавления) полипептидных антибиотиков с плохой диффузией в агар. То есть для полимиксина, ристомицина и т.д. предпочтительнее использовать серийное разведение.

Методы разведения

Количественные методы используются для выявления МКП и минимальных концентраций бактерицидного действия. То есть, с их помощью можно определить минимальный уровень антибиотика, который будет предотвращать видимый рост бактерий.

При помощи методов разведения можно рассчитать необходимую дозу препарата (терапевтическая концентрация в крови должна значительно превышать МКП). При использовании метода серийного разведения, вначале готовится основной р-р, со строго определенной концентрацией антибиотика в специальной питательной среде. Из него готовятся все последующие разведенные р-ры.

Далее, в каждую пробирку (чашку Петри) с разведениями добавляют изучаемую культуру возбудителей. После этого, все посевы подвергаются инкубации в термостате при температуре 370С на одни сутки. По окончанию инкубации оценивают результаты и выявляют МКП по отсутствию зоны роста (в чашке Петри) или помутнения  (среды в пробирке).

Оценивание результатов проводится при помощи специальных таблиц с стандартными показателями диаметров ингибирования роста и МКП для резистентных (для этих штаммов указывается только зона ингибирования роста), малочувствительных и чувствительных.

Читайте далее: Как сдавать посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам?

Источник: https://lifetab.ru/vse-o-rezistentnosti-i-metodah-opredeleniya-chuvstvitelnosti-bakteriy-k-antibiotikam/

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Медицина Антибиотики: виды, классификация, механизм действия
< Предыдущая СОДЕРЖАНИЕ Следующая >

Перейти к загрузке файла

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиопрепаратам определяют 2-мя группами методов: диско-диффузным (метод диффузии в агар с применением бумажных дисков с антибиотиками) и методом разведений антибиотика в плотной или жидкой питательной среде. Выбор метода зависит от цели исследования и возможностей лаборатории.Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам необходимо определять в каждом случае инфекции и периодически – в ходе лечения. Главным показателем чувствительности является минимальная ингибирующая концентрация – МИК (мкг/мл), т. е. минимальная концентрация антибиотика, задерживающая рост микроба-возбудителя в стандартном опыте. Значение величины МИК определяют методом серийных разведений или методом диффузии в агар (дисками или Е-тестами). В любом случае критерием чувствительности является значение величины терапевтического индекса: Т = МИК/К, где К – концентрация данного антибиотика (мкг/мл) в очаге инфекции (или в крови) при введении терапевтических доз препарата.Микроб чувствителен, а антибиотик обычно клинически эффективен при Т < 0,3. Значения К можно найти в специальных таблицах.На практике величина МИК позволяет отнести испытуемый штамм микроорганизма к одной из 3-х категорий: чувствительной, умеренно-устойчивой, устойчивой.Микроорганизм считают чувствительным, если у него нет механизмов резистентности к данному антимикробному средству и при лечении стандартными дозами инфекции, вызванной данным микроорганизмом, отмечается хорошая терапевтическая эффективность. Устойчивым к антимикробному средству считают микроорганизм, если он имеет механизмы резистентности к данному препарату и при лечении инфекций, вызванных этим микроорганизмом, нет клинического эффекта даже при использовании максимальных терапевтических доз этого препарата. К умеренно-устойчивым относят микроорганизм, если по своей чувствительности он занимает промежуточное значение между чувствительными и устойчивыми штаммами и при лечении инфекций, вызванных данным возбудителем, хорошая клиническая эффективность наблюдается только при использовании высоких терапевтических доз препарата (или при локализации процесса в местах концентрации антимикробного средства, например, в моче при мочевых инфекциях).Методом серийных разведений МИК определяют по минимальной концентрации антибиотика, задерживающей видимый рост микроба в пробирках или чашках с питательной средой, содержащих убывающие концентрации антибиотика. Например, для определения МИК тетрациклина в отношении культуры Staphylococcus aureus, выделенной от больного, в ряду пробирок готовят двукратно убывающие концентрации этого антибиотика в стандартном питательном бульоне, для чего содержимое пробирки перемешивается и переносится 1 мл из 2-й пробирки в 3-ю, из 3-й - в 4-ю и т. д., а из последней пробирки 1 мл удаляется (таблица). Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (МИК, мкг/мл) методом серийных разведений в бульоне.
ИнгредиентыНомер опытной пробирки (конечная концентрация антибиотика мкг/мл)Контроль
1 2 3 4 5 (64) (32) (16) (8) (4)КультурыБульоныАнтибиотики
1. Бульон, мл111111
2. Раствор антибиотика (64 мкг/мл), мл111
3. Испытуемая культура/стандартизованная суспензия222222

Инкубирование в оптимальных для культуры условиях 18-24 ч.

Пример учета
Интерпретация результата: МИК тетрациклина в отношении испытуемой культуры – 16 мкг/мл.

Учетным признаком при этом является наличие или отсутствие мутантности бульона в пробирках. В контроле культуры должна быть мутантность, в остальных контролях – нет.

Величина МИК соответствует той минимальной концентрации, при которой отсутствует мутность (бульон в пробирках прозрачен). Так, если бульон будет мутным в 4-й или 5-й опытных пробирках, МИК тетрациклина = 16 мкг/мл.

Известно, что величина К тетрациклина при введении среднетерапевтических доз – 2 мкг/мл (при использовании максимальных доз – 10 мкг/мл). Следовательно, в данном случае терапевтический индекс будет равен Т = 16/2 = 8 (> 0,3), т. е.

возбудитель устойчив к антибиотику и лечение тетрациклином не дает антимикробного эффекта в отношении Staphylococcus aureus у данного больного даже при введении максимальных доз (Т = 16/10 = 1,6).

Метод серийных разведений считается наиболее точным, но относительно трудоемким.

При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают «газоном» на питательной агар в чашке, например, тампоном, смоченным в стандартизованной (108 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма.

Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика.

После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику. Каждому значению диаметра зоны вокруг диска с антибиотиком соответствует определенное значение МИК.

Исходя из этих значений, для каждого антибиотика рассчитаны величины терапевтического индекса, что позволяет по диаметру зоны определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику: чувствительные (S), умеренно-устойчивые (I) и устойчивые (R).

К категории S (от английского sensitive – чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию I (от английского intermediate – промежуточный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R (от английского resistant – устойчивый) составляют те микроорганизмы, в отношении которых данный антибиотик будет неэффективным in vivo.

Метод определения чувствительности с помощью Е-тестов. Последние представляют собой бумажные полоски, пропитанные не одной, а рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16, 8, 4,…, мкг/мл).

Е-тесты укладывают на поверхность стандартного питательного агара, засеянного испытуемой культурой в виде «газона».

После инкубирования вокруг полоски формируется элипсовидная зона задержки роста, которая сужается в области малых концентраций и «пересекает» полоску на уровне, соответствующем величине МИК.

Метод серийных разведений в планшетах. Используют готовые стерильные полистироловые 96-луночные планшеты, в лунки которых внесены и лиофильно высушены убывающие концентрации антибиотиков в бульоне.

После вскрытия планшета стандартизованную суспензию испытуемой культуры в одинаковой дозе (например, 0,1 мл) асептически вносят в соответствующие ряды лунок, закрывают крышкой и инкубируют при оптимальной температуре. Среда при этом восстанавливается, что позволяет после инкубирования планшета отметить рост (помутнение бульона) в тех лунках, где антибиотик не действует.

При помутнении бульона в контроле культуры и опытных лунках определяют величину МИК. Учет можно вести как визуально, так и с помощью специальных микробиологических анализаторов.

Метод пограничных концентраций можно считать усеченным методом серийных разведений. В соответствии с ним испытуемую культуру вносят только в две лунки (пробирки), где находятся высокая (С) и низкая (с) концентрации антибиотика.

Концентрация С соответствует границе между устойчивыми и умеренно-устойчивыми штаммами, а концентрация с – границе между умеренно-устойчивыми и чувствительными штаммами.

Если после инкубирования рост отсутствует в обеих лунках, штамм относят к чувствительным, если только в лунке с концентрацией С – к умеренно-устойчивым штаммам, а если в обеих лунках имеется рост, штамм относят к устойчивым.

Важными условиями являются:

  • – использование только чистых культур и соблюдение правил асептики;
  • – применение стандартных питательных сред, соответствующих питательным потребностям испытуемого микроорганизма (среда Миеллера-Хинтона, агар АГВ, среда НТМ и др.);
  • – внесение испытуемой культуры в стандартной дозе и соблюдение установленного соотношения инокулюм/среда;
  • – правильный режим инкубирования и метод учета.

Чувствительность к антибиотикам желательно проверять у свежевыделенных культур, выделенных из материала до начала антибиотикотерапии, и повторять исследование с культурами, выделенными в ходе лечения.

В последние годы в практике стали применять ПЦР для выявления у микробов специфических генов, ответственных за формирование лекарственной устойчивости (геноиндикация антибиотикоустойчивых культур).

Производство антибиотика пенициллина с момента его открытия в 1928 году спасло миллионы жизней. С тех пор благодаря селекции высокопродуктивных мутантных штаммов, а также разработке методов культивирования, выделения и очистки производство пенициллина возросло примерно в 2000 раз, а каждый год открываются примерно 50 новых антибиотиков.

Основными продуцентами антибиотиков являются бактерии, актиномицеты и микроскопические грибы. Бактерии, продуцирующие антибиотики, представлены в основном родом Bacillus. К антибиотикам, образуемым бактериями, относятся: грамицидин С (В. brevis), полимиксины (В. polymyxa), бацитрацины (В. licheniformis), ницины (Streptococcus Lacus).

Актиномицеты, синтезирующие антибиотики в основном представлены родом Streptomyces (S. griseus, S. fradiae, S. kanamyceticus, S. aurefaciens и др.). Антибиотики, образуемые актиномицетами, ранообразны по химическому строению: амино-гликозиды, тетрациклины, актиномицины, макролиды и другие. Грибы – продуценты антибиотиков представлены родом Renicullium и Aspergillus.

К антибиотикам, образуемым мицелиальными грибами, относятся пенициллин и цефалоспорин.

Page 3

Перейти к загрузке файла
  • 1. Н. Г. Преферанский. Фармакология. Москва «Медицина» 2004 г.
  • 2. Никитин Е. В., Киямова С. Н., Решетина О. А. Микробиология 2008 г.
  • 3. Д. А. Харкевич. Фармакология. Издательский дом ГЭОТАР – МЕД 2004 г.
  • 4. А. В. Алешукина. Медицинская микробиология. Ростов-на-Дону. Феникс. 2003 г.
  • 5. О. К. Поздеев. Медицинская микробиология учебное пособие для ВУЗ-ов М.2005 г.

  Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter

Источник: https://studwood.ru/1605409/meditsina/metody_opredeleniya_chuvstvitelnosti_antibiotikam

Расшифровка анализа на чувствительность к антибиотикам

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Анализ на чувствительность к антибиотикам называется бактериальным посевом.

За счет проведения этих мероприятий врач может точно определить вид возбудителя и его уровень концентрации в организме. Цель состоит в выявлении в полученном материале вредных микроорганизмов.

Это в дальнейшем помогает подобрать необходимое лечение, которое сможет быстро подавить активность патогенных организмов.

После применения антибиотиков микроорганизмы могут проявлять разное состояние. По этой причине их разделяют на несколько разновидностей:

  • чувствительного типа;
  • условно-устойчивого вида;
  • устойчивого вида.

Чувствительными микроорганизмами считаются те, активность которых подавляется установленными дозировками антибиотических медикаментов. Для снижения деятельности условно-устойчивых бактерий необходимо повышать дозировки антибиотика. А вот активность устойчивых организмов не прекращается даже после поступления повышенных дозировок антибиотического средства.

При этом у каждого человека уровень чувствительности микрофлоры к антибиотическим препаратам у каждого индивидуальный. У разных людей микроорганизмы могут реагировать на одни и те же антибиотические средства по-разному.

По этой причине иногда назначение антибиотических средств только лишь на основании состояния больного и среднестатической клинической картины не всегда может обеспечить положительное воздействие.

Поэтому обязательно нужно сдать анализы на чувствительность к антибиотикам.

Преимущества и недостатки

При приеме антибиотиков врачи рекомендуют проведение бакпосева. При этой процедуре проводится исследование организма человека на чувствительность к составляющим компонентов антибиотиков. Этот метод отличается повышенной специфичностью, при котором не наблюдается перекрестных ложных реакций.

Сдается анализ для того, чтобы выявить уровень чувствительности патогенных бактерий к лечебным антибиотическим средствам. Благодаря этому можно будет в дальнейшем подобрать эффективную лечебную терапию.

Но у этой процедуры имеются и недостатки. К наиболее популярным относятся:

  1. Длительный процесс получения результата;
  2. Имеются повышенные требования к забору материала;
  3. Персонал лаборатории, который должен проводить анализ, должен обладать высокой квалификацией.

Показания и материал

Для того чтобы определить степень чувствительности к антибиотикам для начала стоит изучить при каких показаниях нужно сдавать анализы. Часто исследование крови при приеме антибиотиков проводится при инфекционных патологиях. Особенно часто к этому методу прибегают в гинекологии, урологии, хирургии, онкологии, отоларингологии и в других областях медицины

Главным показанием для проведения исследования считаются патологии с воспалительным характером внутренних органов и систем, а также признаки сепсиса.

Для исследования восприимчивости организма к антибиотикам можно сдавать разный материал:

  • кровь. Биохимический анализ крови помогает оценить общее состояние организма. Кровь должна быть стерильна, поэтому она берется в лаборатории;
  • урина или моча. При исследовании этого материала определяется бактериальная микрофлора половой системы;
  • кал. При помощи исследования кала врач может оценить состояние пищеварительной системы;
  • сперма, секрет простаты, слизь из уретры. Исследование этого материала помогает определить, какой возбудитель вызвал проблемы в мочеполовой системе у мужчин;
  • мокрота. Исследование мокроты помогает вывить возбудителя заболеваний дыхательной системы.

Можно ли принимать препараты перед сдачей анализа крови?

Некоторые пациенты просто не знают — влияют ли антибиотики на анализ крови. Но это исследование обладает несколькими важными правилами, от соблюдения которых зависит ее результат. Если их заранее не изучить, то в полученном результате могут наблюдаться некоторые отклонения от нормы.

Так влияет ли прием антибиотиков на анализ крови? Ведь иногда такое исследование делается прямо после приема, антибиотиков, поэтому его результаты могут быть не точными. Но для того чтобы этого не произошло, нужно точно соблюдать несколько рекомендаций:

  1. Желательно перестать принимать антибиотические средства за 10 дней до этой процедуры, иначе анализ крови после антибиотиков будет просто бессмысленным;
  2. Обязательно врачу нужно сообщить о приеме других медикаментозных средств;
  3. Не рекомендуется проводить исследование крови при приеме любые лекарственных средств. Их нельзя принимать в течение 24 часов до проведения биохимического анализа;
  4. Все анализы выполняются на голодный желудок, потому что прием пищи может вызвать повышение таких показателей, как глюкоза, холестерол, билирубин. От пищи нужно отказаться минимум за час до проведения процедуры;
  5. Делая анализ на гормоны нужно учитывать время суток, часы. При заборе крови из вены оказывает влияние активность человека, его эмоциональное состояние.

Выполняя анализ крови на стерильность, врач должен учитывать наличие возбудителей, давность инфицирования, а также состояние иммунитета. Также он должен изучить, как влияет прием антибиотиков на анализ, потому что от этого могут измениться результат.

После приёма антибиотиков должно пройти определенное время, а вот, сколько определяет только специалист, но не меньше 10 дней. Если вдруг результаты будут не точными, то может быть проведен повторный анализ, а вот через какое время решает специалист.

Особенности сдачи анализа на чувствительность к антибиотикам

Качество исследования зависит от нескольких факторов, главный из которых является соблюдение правил при заборе материала для проведения исследования. Подготовка материала к обследованию должна быть выполнена правильно.

Обязательно материал нужно помещать в стерильную посуду и брать стерильными инструментами, иначе в нем могут быть обнаружены и другие бактерии.

Доставка в лабораторию должна быть быстрой, потому что может произойти быстрое изменение кислотности материала.

Как сдавать материал на анализ:

  • анализ мочи на флору. Забор мочи на флору и чувствительность к антибиотикам выполняется в утренний период. Для этого нужно собрать среднюю порцию урины. Ее объем должен составлять не меньше 10-15 мл. При сдаче мочи на микрофлору посуда должна быть чистой и стерильной. Для проведения обследования мочи на микрофлору необходимо соблюдать все важные рекомендации. Важно доставить материал в лабораторию в течение 2 часов. А вот можно ли сдавать анализ мочи во время приема антибиотиков точно может ответить врач, но делать этого нежелательно. Предварительно специалист должен сделать анализ мочи на стерильность;
  • сдача кала. Анализ кала на дисбактериоз помогает определить состояние органов пищеварительной системы и выявить наличие различных возбудителей. Материал нужно помещать в стерильную посуду. Его объем должен составлять 20-30 грамм. Максимальное время его доставки в лабораторию должно составлять 5 часов;
  • анализ мокроты на антибиотики необходимо проводить утром. Предварительно нужно очистить рот и зубы. Материал сдайте в лабораторию в течение часа;
  • анализ крови на стерильность можно сдавать после приема антибиотиков. Материал берется в лабораторных условиях. Правильно проведенное иследование помогает выявить уровень сопротивляемости организма, а также наличие бактерий. Также кровь берется для того, чтобы провести анализ на иммуноглобулин, при помощи него выявляется наличие заболеваний и патогенных организмов, снижающих иммунитет. Результат можно получить через несколько суток – 2-3;
  • анализ спермы. Спермограмму выполняют в лаборатории, там сразу берется материал и обследуется. Анализ спермы позволяет определить наличие различных патологий мужской мочеполовой системы.

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными.

Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Источник: https://zdorovo.live/muzhskoe-zdorove/rasshifrovka-analiza-na-chuvstvitelnost-k-antibiotikam.html

Методы определения МПК

К методам определения МПК относятся:

  1. Методы разведения
    1. Методы разведения (дилюции) в бульоне.
      1. Метод микродилюции
      2. Метод макродилюции
    2. Методы разведения в агаре
  2. Диффузионные методы
    1. с использованием дисков с антибиотиками
    2. с помощью E-тестов.

Приготовление заданных разведений

Готовится бульон, содержащий убывающее количество антибиотика,

также готовится контроль, не содержащий антибактериального агента.

Добавление бактериальной суспензии

К каждому из разведений антибиотика добавляется определенное количество выделенных бактерий.

Инкубация в течение 1-й ночи

Пробирки, содержащие бульон, антибиотик и бактерии оставляем на ночь при t=35-37о .

Анализ результатов

Мутный бульон свидельствует о росте бактерий. Минимальное содержание антибиотика, где бульон будет свободен от роста бактерий, будет считаться МПК для данного штамма.

Процедура аналогичная для метода разведения в агаре. Метод микродилюции отличается от метода макродилюции объемом используемомого материала.

Диффузионные методы

Определение чувствительности диско-диффузионным методом предполагает следующие этапы:

Помещение бактерий

Помещение суспензии бактерии заданной концентрации (1-2 х 108  КОЕ/мл) в чашку Петри с агаром.

Помещение дисков с антибиотиками

Коммерческие диски, с нанесенным антибиотиком, помещаются в чашку Петри. Диски равномерно распределены по поверхности агара. Антибиотик начинает мгновенно распространяться из диска на поверхность чашки Петри, создавая градиент концентрации таким образом, что наибольшее содержание антибиотика находится возле диска.

Инкубация на сутки

Чашка Петри, содержащая питательную среду (агар), суспензию бактерии и диски с антибиотиками помещаются в термостат для инкубации на сутки при при t=35-37о

E-TEST

E-TEST (BioMerieux) — коммерческий тест, который представляет из себя полоску с нанесенным антибиотиком. Антибактериальное вещество наносится по градиенту концентрации от высокого к низкому, со шкалой, отображающей концентрацию антибиотика в данном месте.

E-test — быстрый и простой метод, в то же время достаточно дорогой, так как для каждого антибиотика необходима отдельная полоска.

Механизм-специфические тесты

Наличие у бактерии определенного механизма резистентности может быть определено механизм-специфическими тестами. Например, наличие b-лактамаз можно определить в  хромогенном тесте на цефалоспориназы ( Цефиназный диск от BD Microbiology Systems ).

Цефиназный диск будет полезен для определения резистентности к пенициллинам/цефалоспоринам у штаммов Neisseria gonorrhoeae, Staphylococcus, Haemophilus influenzae, энтерококков и некоторых аэробных бактерий. Метод не стоит использовать для выявления b-лактамаз широкого спектра.

Генетические методы

Так как резистентность закодирована в генах, некоторые методы генотипирования могут быть использованы для их выявления. Большинство из генетических методов являются высокочувствительными и быстрыми. Стоит однако помнить, что присутствие генов резистентности не всегда означает, что терапия будет неэффективна. Многое зависит от степени экспрессии гена резистентности.

Поделитесь новостью:

Источник: https://massmedika.in.ua/metodi_opredeleniya_chuvstvitelnosti/

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Морфологическаяидентификация – определениевида бактерий за их морфологическими

признаками.

Принимаютво внимание форму и внешние признакибактерии (кокки, палочки,спирохеты), навнисть капсулы,

споры, жгутиков.

Морфологическаяи тинкториальна идентификация

бактерий.

Культуральнаяидентификация – определениевида бактерий за их культуральными

свойствами.

Принимаютво внимание характер роста бактерий нажидких и плотных питательных средах(характеристика колоний, рост на жидкой

среде).

Модуль III «Основы антибактериальной химиотерапии»

Тема 1: Химиопрепараты,антибиотики. Определение чувствительности

микрооргнизмов к антибиотикам

Цель занятия:знатьклассификацию,основные группы химиопрепаратов иантибиотиков, механизм их действия,побочное действие, получение антибиотиков;методы определения чувствительности

микроорганизмов к антибиотикам.

уметьставить опыт по определению чувствительностимикроорганизмов к антибиотикам методомбумажных дисков; учитывать результатыопределения спектра действия антибиотиков,чувствительности микроорганизмов к

антибиотикам методом серийных разведений.

I.
Вопросы для самоподготовки:

    1. Основные группы
      химиопрепаратов и антибиотиков

    2. Механизмы действия
      антибиотиков на микроорганизмы

    3. Побочное действие
      антибиотиков

    4. Механизмы
      антибиотикорезистентности микроорганизмов

    5. Методы определениячувствительности микроорганизмов к

      антибиотикам

II. Базовый текст

1. Основные
группы химиопрепаратов и антибиотиков

Основная цельприменения антибактериальных агентов– подавление размножения или уничтожениевозбудителя при отсутствии токсическогодействия на клетки организма. В настоящеевремя арсенал антибактериальных средств

составляют антибиотики и химиопрепараты.

Антибиотики классифицируют и характеризуютпо их происхождению, химической структуре,механизму действия, спектру активности,частоте развития лекарственной

устойчивости и т.д.

Классификация по способу
получения:

  • природные (биосинтетические) – ихпродуцентами выступают специальные

    штаммы микроорганизмов (хлорамфеникол);

  • синтетические – источником их получения
    является химический синтез (левомицетин);

  • полусинтетические – получают химическимсоединением природного антибиотика,точнее его «ядра», с различными

    химическими радикалами.

Классификация по типу продуцента:

  • антибиотики, синтезируемые грибами
    (бензилпенициллин, цефалоспорины);

  • антибиотики, синтезируемые актиномицетами
    (стрептомицин, эритромицин и др.);

  • антибиотики, синтезируемые бактериями
    (полимиксины и др.).

Классификация по
характеру действия:

  • микробоцидные—губительно действующие на микробыза счет необратимых повреждений

    (пенициллины, цефалоспорины)

  • микробостатические— ингибирующиерост и размножение микробов (макролиды,

    тетрациклины).

Классификация по спектру действия:

  • узкого спектра — активны в отношениинебольшого количества разновиднос­тейили грамположительных, или грамотрицательных

    бактерий;

  • широкого спектра — активны в отношенииграмположительных и грамотрицательных

    бактерий

Классификация антибиотиков по
химическому строению:

  • бета-лактамные антибиотики

  • аминогликозиды

  • тетрациклины

  • макролиды

  • линкозамиды

  • гликопептиды

  • полипептиды

  • полиены

  • антрациклиновые
    антибиотики

Бета-лактамныеантибиотики(основумолекулы составляет бета-лактамноекольцо):Пенициллины— группаприродных, продуцируемых грибами родаPenicillum,и полусинтетических антибиотиков,молекула которых содержит6-аминопенициллановуюкислоту, состоящую из 2 колец —

тиазолидонового и беталактамного.

  • биосинтетические
    (пенициллинG

    — бензилпенициллин)

  • аминопенициллины
    (амоксициллин, ампициллин, бекампициллин)

  • полусинтетические«антистафилококковые» пенициллины(оксациллин,метициллин, клоксациллин, диклоксациллин,флуклоксациллин),основное преимущество которых —устойчивостьк микробным бета-лактамазам, в первую

    очередь продуцируемым стафилококками

Цефалоспорины— это природныеи полусинтетические антибио­тики,полученные на основе 7-аминоцефалоспориновойкисло­ты исодержащие цефемовое (также бета-лактамное)кольцо,т. е. по структуре они близки

к пенициллинам:

  • 1-го поколения — цепорин, цефалотин,
    цефалексин;

  • 2-го поколения — цефазолин (кефзол),
    цефамезин, цефамандол (мандол);

  • 3-го поколения — цефуроксим(кетоцеф), цефотаксим (клафоран),цефуроксим аксетил (зиннат), цефтриаксон

    (лонгацеф), цефтазидим (фортум);

  • 4-го поколения — цефепим, цефпиром
    (цефром, кейтен) и др.;

Карбапенемы(имипенем,меропенемидр.)—из всех бета-лактамовимеют самый широкий спектр действия и

резистентны к бета-лактамазам.

Монобактамы(азтреонам(азактам),небактамидр.) —резистентнык бета-лактамазам.Спектр действия узкий (очень активныпротив грамотрицательных бактерий, втом числе против синегнойной

палочки).

Аминогликозидысодержатаминосахара, соединенные гликозиднойсвязью с остальной частью (агликоновым

фрагментом) молекулы:

  • синтетические
    аминогликозиды —стрептомицин, гентамицин (гарамицин),канамицин, неомицин, мономицин,

    сизомицин, тобрамицин (тобра);

  • полусинтетические
    аминогликозиды — спектиномицин,амикацин (амикин), нетилмицин

    (нетиллин).

Тетрациклины -полифункцио­нальноегидронафтаценовое соединение с родовым

названием тетрациклин:

  • природныететрациклины — тетрациклин,
    окситетрациклин (клинимицин);

  • полусинтетическиететрациклины— метациклин, хлортетрин, доксициклин

    (вибрамицин), миноциклин, ролитетрациклин.

Макролидысодержат в своеймолекуле макроциклическое лактоновоекольцо, связанное с одним или не­сколькимиуглеводными остатками: эритромицин,олеандомицин, рокситромицин (рулид),азитромицин (сумамед), кларитромицин

(клацид), спирамицин, диритромицин.

Линкозамидыпо фар­макологическими биологическим свойства оченьблизки к макролидам, но в химическомотношении это совершенно иные препараты:

линкомицин и клиндамицин.

Гликопептидыв своей молекулесодержат замещенные пептидные соединения:ванкомицин (ванкацин, диатрацин),

тейкопланин (таргоцид), даптомицин.

Полипептидыв своей молекулесодержат остатки полипептидныхсоединений: грамицидин, полимиксины М

и В, бацитрацин, колистин.

Полиеныобладают ярко выраженнойпроти­вогрибковой активностью,изменяя проницаемость клеточноймембраны путем взаимодействия(блокирования) со стероид­нымикомпонентами, входящими в ее составименно у грибов, а не у бактерий: нистатин,

афортецин В.

Антрациклины —противоопухоле­выеантибиотики: доксорубицин, карминомицин,

рубомицин, акларубицин.

Вна­стоящее время в практикешироко используют антибиотики, неотносящиеся ни к одной из перечисленныхгрупп: фосфомицин, фузидиевая ки­слота

(фузидин), рифампицин.

Определение антибиотика в биологических жидкостях

Этосамая многочисленная группа антибиотиков,включаю­щая разнообразные по своемухимическому составу природные соединения,преимущественно продуцируемыеактиномицетами. К ним относятсяаминогликозидные антибиотики, группатетра­циклина, левомицетин, макролиды

и др.

Первыйантибиотик этой группы стрептомицинбыл выделен 3. Ваксманом с соавторамиеще в 1943г. вслед за пеницилли­ном. В настоящеевремя в группу включены стрептомицинасуль­фат, стрептосульфамицина сульфат,

дегидрострептомицина суль­фат и др.

Стрептомицин являетсясложным органическим основанием,молекула которого состоит из трехчастей: стрептидина, стрептозы

и N-метилглюкозамина.

Антибактериальныйспектр стрептомицина и его производныхвключает большое число видовграмотрицательных бактерий: кишечнаяпалочка, шигеллы, клебсиеллы, бруцеллы,

бактерии туляремии, чумы, вибрион холеры.

К ним чувствитель­ны гноеродные кокки,в том числе устойчивые к пенициллину.Основной особенностью стрептомициновявляется их способность подавлять

размножение микобактерии туберкулеза.

Механизмантибактериального действия стрептомициназаключается в способности блокироватьсубъ­единицу рибосомы 30S,а также нарушать считывание генети­ческогокода. При этом кодоны иРНК неправильносчитываются антикодонами тРНК- Например,кодон УУУ, кодирующийфенилаланин, считывается какАУУ, врезультате чего его место занимаетизолейцин, что приводит к образованиюненужного для бактериальной клетки

полипептида.

Недостаткомстрептомицина является быстроевозникновение к нему резистентных

бактерий.

Каминогликозидам 1-го поколения нарядусо стрептомици­ном относятся мономицин,неомицин, канамицин; аминогликозиды2-го поколения — гентамицин, тобрамицин,сизомицин, амикацин (полусинтетическое

производное канамицина).

Перечисленныеантибиотики отличаются друг от другапо химической структуре и фармакологическим

свойствам.

Антибактериальныйспектр этих антибиотиков в основномсходен со стрептомициновым. Однакочувствительность к каж­дому из нихварьирует в зависимости от вида и штамма

пере­численных бактерий.

Например, кмономицину более чувстви­тельныстафилококки, шигеллы, клебсиеллы,малочувствитель­ны стрептококки,чувствительность протеев широкоизменяется. Гентамицинболее активен, чем другие аминогликозиды,в отношении протеев, тобрамицин —

синегнойной палочки.

Сизомицин поантибактериальному спектру близок кгентамицину, но отличается от него болеевысокой активностью. Амикацин являетсяодним  из  наиболее

активных аминогликозидов.

Резистентностьбактерий к аминогликозидным антибиотикамв отличие от стрептомицина формируетсяпостепенно. Кроме того, бактерии,резистентные к одному из препаратовгруппы стрептомицина, приобретаютустойчивость и к другим препара­тамэтой группы, но сохраняют чувствительность

к аминоглико­зидным антибиотикам.

Вместе с тем бактерии обычно приобре­таютперекрестную устойчивость к неомицину,мономицину, канамицину или к гентамицину,тобрамицину, сизомицину. Однако многиеиз них сохраняют при этом чувствительность

к амикацину.

Кданной группе относятся рифамицины —родственные

ан­тибиотики,  продуцируемые  разными  видами  актиномицетов.

Врезультате химической модификацииодного из них был полу­чен полусинтетическийаналог рифамицина, получивший название

рифампицин,   с  -более  ценными   антибиотическими   свойствами.

Рифампицинобладает широким антибактериальнымспектром, оказывает бактерицидноедействие на грамположительные играмотрицательные бактерии,неспорообразующие анаэробы (бактероиды

и др.

), клостридии, иерсинии, гемофильнуюпалочку, лептоспиры. Кроме того, рифампицинактивен в отношении микобактерийтуберкулеза. Устойчивыми к нему являются

спирохеты, микоплазмы, грибы, простейшие.

Рифампи­цин применяется главнымобразом для лечения туберкулеза легкихи других органов, особенно если он вызванбактериями, резистентными к другимпротивотуберкулезным химиотерапевтическим

веществам.

Механизмантибактериального действия рифампициназаключается в его способности подавлятьактив­ность ДНК-зависимой РНК-полимеразыи тем самым блокиро­вать синтез белка

на уровне транскрипции.

Еще один из доступных методов выявления чувствительности бактерий к используемым антибактериальным препаратам. Вначале исследования ставят 2 ряда пробирок – с эталонным антибиотиком и с биологической жидкостью (кровью или мочой).

Тест-бактерии, которые изготавливают в среде Гипса с глюкозой, вводят в каждую исследуемую пробирку. Если биологическую жидкость изучают на чувствительность к пенициллину, тетрациклину и эритромицину, то в роли тест-бактерии выступает S.aureus, а если к стрептомицину – то E.coli.

Подготовленные посевы помещают в термостат и инкубируют при температуре 37 °С на протяжении 18–24 часов. Оценивают результаты этого исследования согласно степени помутнения и окрашивания индикатора.

Тема 2: Инфекционный процесс. Факторы патогенности бактерий. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Цель:знать:понятие «инфекционогопроцесса», «инфекционного заболевания»;виды и формы инфекции; факторы патогенностибактерий; вирулентность и единицывирулентности; биологический методдиагностики инфекционных заболеваний;основные цели и этапы биологического

метода.

уметь:определять основные факторыпатогенности бактерий (структурыбактериальной клетки, токсины и

экзоферменты).

Задание
на дом:

  1. Вопросы для самоподготовки:

    1. Учение обинфекции. Понятия «инфекция» и

      «инфекционное заболевание»

    2. Формы
      симбиоза

    3. Классификацииинфекционных заболеваний и форм

      инфекций

    4. Периоды и
      исходы инфекционного заболевания

    5. Патогенность
      и вирулентность, единицы вирулентности

    6. Основные
      факторы патогенности микроорганизмов

    7. Микробные
      токсины

    8. Биологическийметод диагностики инфекционных

      заболеваний

Источник: https://triparazita.ru/toksoplazmoz/opredelenie-chuvstvitelnosti-bakteriy-antibiotikam/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.